产品内容：
试剂一：液体60mL×2瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加3 mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体3mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：
APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影响到AsA 的含量，在胁迫和解胁迫条件下，APX 与AsA 具有一定的负相关性。
APX催化H2O2氧化AsA，通过测定AsA 的氧化速率，可计算得APX 活力。
试验中所需的仪器和试剂：
低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
 
操作步骤：	
一、粗酶液提取 ：   
 称取约0.1g样品，加1 mL试剂一，冰上充分研磨，13000g  4℃离心20min，取上清液。
二、测定操作表：
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长到265 nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂一在25℃中预热30min以上。
3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、140μL预热的试剂一、20μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后在290nm测定10s和130s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。
4. 测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、140μL预热的试剂一、20μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后在290nm测定10s和130s光吸收A3和A4，△A测定管=A3-A4。
三、APX 活力计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA 为1U。
APX(U/mg prot) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T
=1.79×(△A测定管-△A空白管) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
活性单位定义：每克样品每分钟氧化1μmol AsA 为1U。
APX(U/g 鲜重) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(V样÷V样总×W)÷T
=1.79×(△A测定管-△A空白管) ÷W
    ε：AsA在290nm处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10-4 L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；W ：样品质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL=0.02mL；V样总：加入试剂一体积，1mL；T：催化反应时间（min），2min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算, 
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA 为1U。
APX(U/mg prot) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T
=3×(△A测定管-△A空白管) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
活性单位定义：每克样品每分钟氧化1μmol AsA 为1U。
APX(U/g 鲜重) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(V样÷V样总×W)÷T
=3×(△A测定管-△A空白管) ÷W
TUNEology 波长可调检测卡盒-->